Биологическую опасность, или риск для здоровья людей и окружающей среды,могут представлять инфицированныеорганизмы или биологический материал, содержащий микроорганизмы или токсины биологического происхождения.

Биологическая безопасность – порядок осуществления лабораторных исследований и специальное оснащение микробиологических лабораторий, которые защищают персонал лабораторий и окружающую среду при работе с потенциально инфекционными микроорганизмами.

Уровень биобезопасности – уровень мер предосторожности, необходимых при работе с потенциально опасными биологическими агентами. Различают 4 уровня биобезопасности (табл. 1). В зарубежных странах более высокий номер уровня биобезопасности означает возрастающий риск при выполнении лабораторных исследований.

Таблица 1

Характеристика уровней биобезопасности

В Республике Беларусь и России по степени опасности для человека и окружающей среды также выделено 4 группы возбудителей инфекционных заболевани, однако, наоборот, более низкий номер группы означает возрастающий риск при выполнении лабораторных исследований.

I группа – возбудители ООИ: чумы, натуральной оспы, геморрагических лихорадок (Ласса, Эбола и др.).

II группа – возбудители высококонтагиозных бактериальных, грибковых и вирусных инфекций: сибирской язвы, бруцеллеза, туляремии, холеры, сыпного тифа, бластомикоза, бешенства, СПИДа, гепатитов В и С и др., ботулотоксины и столбнячный токсин.

III группа – возбудители других инфекций: коклюша, столбняка, ботулизма, туберкулёза, трихомониаза, малярии, лейшманиоза, гриппа, полиомиелита, герпесвирусы и др.

IV группа – условно-патогенные (возбудители газовой гангрены, клебсиеллы, стафилококки, стрептококки, синегнойная палочка, некоторые кандиды и аспергиллы, амебиаза, аденовирусы, ротавирусы, энтеровирусы и др.) и непатогенные микроорганизмы.

Аттенуированные штаммы возбудителей I–II групп относятся к микроорганизмам III группы патогенности, а аттенуированные штаммы III–IV групп – к IV группе патогенности.

Работа с материалом, содержащим микроорганизмы I–II групп патогенности, требует соблюдения строгих мер безопасности для предупреждения случаев внутрилабораторного заражения, выноса инфекции за пределы лаборатории и предупреждения контаминации окружающей среды, поэтому исследования проводятся в специально оборудованных режимных микробиологических лабораториях специально обученным и вакцинированным персоналом (если существуют вакцины).

Работа с материалом, содержащим микроорганизмы III–IV групп патогенности, регламентируется Санитарными правилами «Безопасность работы с микроорганизмами III–IV групп патогенности и гельминтами», которые приняты к исполнению на территории РБ Постановлением Главного государственного санитарного врача № 40 от 27.07.2000 года. Исследования проводятся в бактериологических лабораториях при лечебно-профилактических учреждениях и при центрах гигиены и эпидемиологии.

В зависимости от выполняемых исследований, микробиологические лаборатории подразделяют на диагностические, производственные и научно-исследовательские. В соответствии с типами микроорганизмов, изучаемых в микробиологических лабораториях, выделяют бактериологические, вирусологические, микологические и протозоологические лаборатории.

В зависимости от уровня безопасности работы с микроорганизмами микробиологические лаборатории подразделяют на четыре группы риска.

I группа – лаборатории особого режима (максимально изолированные) с высоким индивидуальным и общественным риском.

II группа – режимные лаборатории (изолированные) с высоким индивидуальным и низким общественным риском.

III группа – базовые (основные) лаборатории с умеренным индивидуальным и ограниченным общественным риском.

IV группа – базовые (основные) лаборатории с низким индивидуальным и общественным риском.

На практических занятиях студенты работают с микроорганизмами IV группы патогенности. Учебный практикум кафедры микробиологии считается учебной микробиологической лабораторией, где необходимо соблюдать следующие правила:

1. В помещение бактериологической лаборатории нельзя входить без специальной одежды - медицинского халата и шапочки, запрещается приносить в практикум верхнюю одежду. Запрещается посещение студентов, работающих в лаборатории, посторонними лицами. Каждый студент должен работать на закреплённом за ним рабочем месте. Во время работы в лаборатории следует соблюдать тишину, порядок и чистоту.

2. В помещении бактериологической лаборатории категорически запрещается принимать пищу, курить, использовать косметические средства. Ежедневная тщательная уборка помещения производится влажным путём с применением дезинфицирующих жидкостей.

3. В каждой группе назначается постоянный дежурный студент, который осуществляет контроль за поддержанием чистоты и порядка студентами группы на рабочих местах.

4. Всё необходимое для работы на занятии (чашки, пробирки, пипетки, бактериальные петли) студенты берут на специальном столе, туда же ставится выполненная на занятии работа. Пробирки и чашки с инфицированным материалом обязательно подписывают (характер материала, название культуры, дата, № группы, ф. и. о. исследователя). После окончания работы рабочее место должно быть приведено в полный порядок.

5. Перед выполнением работ и после завершения необходимо вымыть руки с мылом. Весь материал, поступающий в лабораторию, должен рассматриваться как инфицированный.

Работа с биоматериалами проводится в резиновых перчатках. Запрещается прикасаться к биоматериалу и микробным культурам руками.

Если контакт с кровью или другими биологическими жидкостями произошел с нарушением целостности кожных покровов (укол, порез), пострадавший должен:

– снять перчатки рабочей поверхностью внутрь;

– выдавить кровь из раны;

– обработать повреждённое место (70% спиртом, или 5% йодом, или 3% раствором перекиси водорода, или другим разрешенным антисептиком);

– руки вымыть под проточной водой с мылом;

– на рану наложить пластырь;

– надеть напальчник;

– при необходимости продолжить работу, надев новые перчатки.

При отсасывании жидкого материала необходимо пользоваться резиновыми грушами, при этом пипетки должны быть закрыты ватными тампонами. Пипетирование ртом строго запрещено!

6. Посевы проводят у спиртовки, фламбируя при этом края пробирок, петли, шпатели!

Запрещается держать вблизи работающих спиртовок легковоспламеняющиеся материалы и вещества, оставлять без присмотра работающие спиртовки. Перед зажиганием спиртовки необходимо удостовериться, что её корпус исправен, фитиль выпущен на нужную высоту и распущен, а горловина и держатель фитиля сухие. Фитиль должен плотно входить в направляющую трубку держателя (иначе возможна вспышка паров внутри спиртовки и взрыв). Зажжённую спиртовку нельзя переносить с места на место, нельзя зажигать одну спиртовку от другой. Гасить спиртовку нужно, накрывая пламя фитиля колпачком, если это невозможно – залить водой. Задувать пламя запрещается.

7. При работе с биоматериалами необходимо пользоваться инструментами (петлями, шпателями, пинцетами, иглами). Инструменты, имевшие контакт с инфицированным материалом, фламбируются в пламени спиртовки, или полностью погружаются в емкости с дезраствором.

По окончании работы использованная стеклянная посуда и ватно-марлевые пробки сбрасывается в раздельные биксы. Ежедневно посуда, в которой содержался инфицированный материал, поступает в мойку после предварительной стерилизации автоклавированием.

8. Окрашивание препаратов проводится в специально отведённых местах. Отработанные предметные стёкла помещаются в эксикатор.

9. Микроскоп – точный оптический прибор, требующий строгого соблюдения правил работы с ним:

– поднимают конденсор до уровня предметного столика;

– открывают диафрагму;

– регулируют яркость встроенного осветителя или освещают поле зрения при помощи зеркала (при малой освещенность используют вогнутое зеркало, при достаточной – плоское);

– на предметное стекло с окрашенным препаратом наносят каплю иммерсионного масла, в которую под контролем глаза осторожно погружают объектив;

– поднимая тубус, смотрят в окуляр и вначале макро-, а потом микровинтом устанавливают чёткое изображение объекта;

– по окончании работы поднимают тубус, снимают препарат, марлевой салфеткой удаляют иммерсионное масло с фронтальной линзы объектива;

– микроскоп ставят в шкаф.

9. При аварии с посудой, содержащей инфицированный материал, или проливании жидкого инфицированного материала надо сообщить преподавателю. Немедленно проводится дезинфекция контаминированных поверхностей и предметов:

– осколки стекла помещают в бикс,

– на место аварии наносят дезраствор, время экспозиции 5–10 мин,

– затем дезраствор вытирают влагопоглощающей тканью.

Проводят антисептическую обработку контаминированных частей тела – мытьё с мылом.

10. При работе с электрооборудованием и электроприборами запрещается проверять наличие напряжения пальцами, переносить включённые приборы, находящиеся под напряжением, пользоваться неисправным элекрооборудованием и электропроводкой. При нарушении правил работы с электрооборудованием и электроприборами возможно поражение людей электрическим током и возникновение пожара.

11. В начале каждого семестра преподаватель проводит инструктаж по технике безопасности при работе с микробными культурами, биоматериалами, спиртовками и электроприборами. Инструктаж фиксируется в журнале личной подписью студента и заверяется подписью преподавателя.

ВНИМАНИЕ! С целью профилактики внутрибольничных инфекций запрещается посещение занятий на клинических базах в халате, в котором студент работал в микробиологической лаборатории!

ПРАВИТЕЛЬСТВО МОСКВЫ

ДЕПАРТАМЕНТ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ

В целях профилактики профессионального заражения медицинских работников опасными инфекционными заболеваниями администрация учреждений здравоохранения обязана организовать обучение персонала методам предосторожности в работе, правилам пользования, средствами индивидуальной защиты и мерам оказания первой помощи при аварийных ситуациях.

Поэтому в каждом учреждении должна быть разработана инструкция по охране труда при выполнении работ с кровью и другими биологическими жидкостями пациентов для проведения инструктажа на рабочем месте с работниками "группы риска".

В качестве практического пособия Департамент здравоохранения направляет примерную инструкцию по охране труда , включающую основные требования безопасности при проведении работ с кровью и другими биологическими жидкостями.

Начальник отдела МТО

В. И.ЗЫКОВ

Приложение

к письму Департамента

здравоохранения города Москвы

от 01.01.2001 г. N

ПРИМЕРНАЯ ИНСТРУКЦИЯ

ПО ОХРАНЕ ТРУДА ПРИ ВЫПОЛНЕНИИ РАБОТ С КРОВЬЮ И

ДРУГИМИ БИОЛОГИЧЕСКИМИ ЖИДКОСТЯМИ ПАЦИЕНТОВ

1. Общие требования охраны труда

1.1. К самостоятельной работе, при которой возможен контакт с кровью и другими биологическими жидкостями, допускаются лица не моложе 18 лет, не имеющие медицинских противопоказаний, обученные безопасным методам работы и прошедшие инструктаж в объеме данной инструкции.

1.2. При работе персоналу следует руководствоваться принципом, что все пациенты потенциально инфицированы.

1.3. При выполнении работ с кровью и другими биологическими жидкостями пациентов возможны механические повреждения кожи:

1.3.1. колотые раны при неосторожном обращении со шприцами и другими колющими инструментами (предметами);

1.3.2. порезы кистей рук:

При открывании бутылок, флаконов, пробирок с кровью или сывороткой;

При работе с контаминированными ВИЧ-инструментами;

1.3.3. укусы психических больных при нападении на персонал.

1.4. Персонал должен выполнять работу в средствах индивидуальной защиты, предусмотренных отраслевыми нормами: халат х/б, медицинская шапочка, медицинские перчатки, надетые поверх рукавов медицинского халата.

При угрозе разбрызгивания крови и других биологических жидкостей работы следует выполнять в масках, защитных очках, при необходимости, использовать защитные экраны, клеенчатые фартуки.

1.5. При работе в морге персонал должен иметь костюм 1 типа:

Халат, нарукавники, водонепроницаемый фартук;

2 пары резиновых перчаток;

4-х-слойную марлевую маску, бахилы;

Защитные очки;

Сапоги или галоши.

1.6. В кабинете подразделения, где возможен контакт персонала с биологическими жидкостями пациентов, должна быть аварийная аптечка "Анти-СПИД", в состав которой входят:

70% этиловый спирт, ватно-марлевые тампоны;

0,05% раствор марганцовокислого калия или навеска препарата в сухом виде с необходимым количеством дистиллированной воды для приготовления раствора;

5% спиртовой раствор йода;

Бактерицидный пластырь;

Глазные пипетки, одноразовый шприц;

Перевязочный материал.

1.7. Медперсонал обязан выполнять требования данной инструкции.

2. Требования охраны труда перед началом работы

2.1. Надеть и привести в порядок рабочую одежду: халат х/б, застегнуть манжеты и полы халата, надеть шапочку и подобрать под нее волосы. На ноги надеть сменную обувь.

2.2. Подготовить и проверить средства индивидуальной защиты.

2.3. Повреждения кожи на руках, если таковые имеются, заклеить пластырем или надеть напальчники.

2.4. Убедиться в укомплектованности аптечки "Анти-СПИД".

2.5. К проведению инвазивных процедур не допускается, персонал в случае:

Обширных повреждений кожного покрова;

Экссудативных повреждений кожи;

Мокнущего дерматита.

3. Требования охраны труда во время работы

3.1. Медперсонал должен неукоснительно соблюдать меры индивидуальной защиты, особенно при проведении инвазивных процедур, сопровождающихся загрязнением рук кровью и другими биологическими жидкостями:

Работать в резиновых перчатках, при повышенной опасности заражения - в двух парах перчаток;

Использовать маски, очки, экраны;

использовать маски и перчатки при обработке использованной одежды и инструментов;

Осторожно обращаться с острым медицинским инструментарием;

Не надевать колпачок на использованную иглу;

после дезинфекции использованные одноразовые острые инструменты утилизировать в твердых контейнерах;

Собирать упавшие на пол иглы магнитом, щеткой и совком;

Микротравмы на руках закрывать лейкопластырем, лифузолем или начальчником. До и во время работы следует проверять, не пропускают ли перчатки влагу, нет ли в них повреждений;

Поврежденные перчатки немедленной заменять. Обработанные после использования перчатки менее прочны, чем новые, и повреждаются значительно чаще. Применение кремов на жировой основе, жировых смазок разрушает перчатки;

Взятие крови у пациентов или проведение других процедур, когда медработник может случайно пораниться использованной иглой, необходимо производить в латексных перчатках, т. к. они уменьшают количество инокулята крови, который передается при уколе;

После снятия перчаток замочить их в дезрастворе на 1 час, руки вымыть с мылом и вытереть индивидуальным полотенцем;

Снимать перчатки осторожно, чтобы не загрязнить руки;

Резиновые перчатки снятые единожды, повторно не использовать из-за возможности загрязнения рук.

3.2. Для предохранения себя от инфицирования через кожу и слизистые оболочки медперсонал должен соблюдать следующие правила:

Избегать притирающих движений при пользовании бумажным полотенцем, т. к. при этом повреждается поверхностный эпителий;

Применять спиртовые дезинфекционные растворы для рук; дезинфекцию рук никогда не следует предпочитать использованию одноразовых перчаток; руки необходимо мыть водой с мылом, каждый раз после снятия защитных перчаток;

После любой процедуры необходимо двукратно тщательно мыть руки в проточной воде с мылом;

Руки следует вытирать только индивидуальным полотенцем, сменяемым ежедневно, или салфетками одноразового использования;

Избегать частой обработки рук раздражающими кожу дезинфектантами, не пользоваться жесткими щетками;

Никогда не принимать пищу на рабочем месте, где может оказаться кровь или отделяемое пациента;

Сделать прививку против гепатита B;

Для защиты слизистых оболочек ротовой полости и носа применять 4-х-слойную марлевую маску. Маска должна плотно прилегать к лицу;

Надевать халат или фартук либо и халат, и фартук, чтобы обеспечить надежную защиту от попадания на участки тела биологических жидкостей. Защитная одежда должна закрывать кожу и одежду медперсонала, не пропускать жидкость, поддерживать кожу и одежду в сухом состоянии.

Передать большую заразную дозу через одежду практически невозможно.

3.3. Использовать барьерные средства защиты необходимо не только при работе с инфицированными пациентами, каждый пациент считается потенциально опасным в отношении инфекционных заболеваний.

3.4. При оказании медицинской помощи ВИЧ-инфицираванным и больным СПИД в медицинских документах и направлениях, на манипуляции с парентеральными вмешательствами указывается на хроническое носительство Hbs Ag с соответствующей маркировкой.

3.5. Все диагностические исследования, лечебные процедуры, оперативные вмешательства ВИЧ-инфицированным пациентам необходимо проводить в последнюю очередь, весь биологический материал дезинфицируется и уничтожается, о чем делаются отметки в истории болезни.

Медицинский инструментарий подвергается 3-х-этапной обработке в соответствии с ОСТ.

3.6. Выполнять манипуляции ВИЧ-позитивному пациенту следует в присутствии второго специалиста, который в случае разрыва перчаток или пореза может продолжить их выполнение.

3.7. При операционных вмешательствах следует использовать двойные перчатки, если это возможно; передавать все острые инструменты в ходе операции через промежуточный лоток, а не из рук в руки, исключить использование пальцев для направления иглы, желательно применять иглодержатель.

3.8. В клинико-диагностической лаборатории при работе с кровью, сывороткой или другими биологическими жидкостями запрещается:

Пипетировать ртом, следует пользоваться резиновой грушей;

Переливать кровь, сыворотку через край пробирки;

Использовать для маркировки пробирок этикетки из лейкопластыря. Пробирки следует маркировать карандашом по стеклу.

3.9. При центрифугировании исследуемого материала центрифуга обязательно должна быть закрыта крышкой до полной остановки ротора.

3.10. При транспортировке крови и других биологических жидкостей нужно соблюдать следующие правила:

Емкости с кровью, другими биологическими жидкостями сразу на месте взятия плотно закрывать резиновыми или пластиковыми пробками;

Запрещается вкладывать бланки направлений или другую документацию в пробирки;

Для обеспечения обеззараживания при случайном истечении жидкости кровь и др. биологические жидкости, транспортировать в штативах, поставленных в контейнеры, биксы или пеналы, на дно которых укладывать четырехслойную сухую салфетку;

Если существует вероятность разбрызгивания крови или биологических жидкостей, надевать защитную одежду (халаты, фартуки) и средства защиты слизистых оболочек лица (маски, закрывающие рот и нос, защитные очки или щитки для защиты глаз);

Если халат и фартук загрязнены биологическими жидкостями следует переодеться как можно быстрее; смену одежды проводить, в перчатках и снимать их в последнюю очередь.

3.11. Разборку, мойку и прополаскивание медицинского инструментария, соприкасавшегося с кровью или сывороткой, нужно проводить после предварительной дезинфекции. Работу осуществлять в резиновых перчатках.

3.12. Предметы одноразового пользования: шприцы, перевязочный материал, перчатки, маски после использования должны подвергаться дезинфекции с последующей утилизацией.

4. Требования охраны труда в аварийных ситуациях

4.1. К аварийным ситуациям относятся:

Разрыв перчаток;

Проколы и порезы колющими и режущими инструментами;

Попадание крови и других биологических жидкостей на слизистые оболочки и кожные покровы;

Разбрызгивание крови во время центрифугирования и др.

4.2. К манипуляциям, которые могут привести к аварийной ситуации, в частности, относятся:

Инвазивные процедуры;

соприкосновение со слизистыми оболочками (целыми и поврежденными);

Соприкосновение с поврежденной кожей пациентов;

контакт с поверхностями, загрязненными кровью или другими биологическими жидкостями.

4.3. При загрязнении рук кровью и другими биологическими жидкостями следует тщательно протереть их тампоном, смоченным кожным антисептиком , после чего вымыть проточной водой с мылом.

При загрязнении рук, защищенных перчатками, - перчатки обработать салфеткой, затем вымыть проточной водой, снять перчатки рабочей поверхностью внутрь, вымыть руки и обработать их кожным антисептиком.

4.4. При загрязнении рук кровью, биологическими жидкостями следует немедленно обработать их в течение не менее 30 секунд тампоном, смоченным кожным антисептиком, вымыть их двукратно водой с мылом и насухо вытереть чистым полотенцем, (салфеткой).

4.5. Если контакт с кровью, другими биологическими жидкостями или биоматериалами сопровождается нарушением целостности кожи (уколом, порезом), то необходимо предпринять следующие меры:

Вымыть руки не снимая перчаток проточной водой с мылом;

Снять перчатки рабочей поверхностью внутрь и сбросить их в дезраствор;

Выдавить кровь из раны;

Вымыть руки с мылом;

Обработать рану 70% спиртом, затем кожу вокруг раны 5% спиртовым раствором йода;

На рану наложить бактерицидный пластырь, надеть напальчник, а при необходимости продолжать работу - надеть новые резиновые перчатки.

4.6. При попадании крови или жидкостей на слизистую носа - закапать 0,05% раствор марганцовокислого калия, рот и горло немедленно прополоскать 70% спиртом или 0,05% раствором марганцовокислого калия.

4.7. При попадании биологических жидкостей в глаза следует немедленно промыть их проточной водой, затем промыть их раствором марганцовокислого калия при помощи одноразового шприца в соотношении 1: 10000.

Раствор приготовляют из навески 0,01 г марганцовокислого калия и 100 мл дистиллированной воды, до полного растворения кристаллов (3 мин.).

4.8. При попадании биологического материала на халат, одежду предпринять следующее:

Одежду снять и замочить в одном из дезрастворов;

Кожу рук и других участков тела при их загрязнении, через одежду, после снятия одежды, протереть 70% раствором этилового спирта;

Поверхность промыть водой с мылом и повторно протереть спиртом;

Загрязненную обувь двукратно протереть тампоном, смоченным в растворе одного из дезинфекционных средств.

4.9. При аварии во время работы на центрифуге дезинфекционные мероприятия начинают проводить не ранее чем через 40 мин. после остановки ротора, т. е. после осаждения аэрозоля . По истечении 40 мин. открыть крышку центрифуги и погрузить все центрифужные стаканы и разбитое стекло в дезраствор.

4.10. При попадании инфицированного материала на поверхности стен, пола, оборудования - протереть их 6%-ной перекисью водорода 3% хлорамином или др. рекомендованными дезсредствами, двукратно с интервалом в 15 минут.

4.11. После обработки слизистых и кожных покровов пострадавшего необходимо:

1) Внести запись в Журнал учета микротравм учреждения (отделения).

2) Оповестить об аварии старшую медсестру и заведующего отделением (кабинетом). Старшая медсестра ставит в известность о случившемся заместителя главного врача по эпидемиологии (или помощника эпидемиолога), главную медсестру, диспансерного врача.

3) Внести записи в медицинскую карту пострадавшего, о полученной микротравме с указанием проведенных профилактических мероприятий.

4.12. При подозрении на заражение медработника инфекционным заболеванием проводится расследование в соответствии с "Положением о расследовании и учете профессиональных заболеваний" (утв. постановлением Правительства РФ от 01.01.2001 г. N 967).

5. Требования охраны труда по окончании работы

5.1. Разовые шприцы и инструменты после использования поместить в непротекаемый контейнер.

5.2. Острые предметы, подлежащие повторному использованию, поместить в прочную емкость для обработки.

5.3. Использованные иглы не ломать вручную, не сгибать, не одевать повторно колпачки.

5.4. Загрязненные кровью перчатки обработать тампоном с дезраствором, снять и погрузить их в емкость с дезраствором на 60 минут (3% раствор хлорамина или 6% раствор перекиси водорода с 0,06% НГК) или кипятить в дистиллированной воде 30 минут.

5.5. Поверхности рабочих столов обработать в конце рабочего дня дезинфицирующими средствами, обладающими вирулоцидным действием.

Для составления данной инструкции использованы инструкции по охране труда при выполнении работ с кровью и другими биологическими жидкостями Городской клинической больницы N 23 (инженер по охране труда) и Психиатрической больницы N 5 (инженер по охране труда).

УО «Пинский государственный медицинский колледж»

Дисциплина «Сестринское дело и манипуляционная техника»

Специальность «Лечебное дело»

Учебно-информационный материал

К практическим занятиям

По разделу № 8 «Подготовка пациентов к лабораторным и инструментальным методам исследования»

Практические занятия №№ 25-26

Рассмотрен, обсужден и утвержден

На заседании цикловой комиссии

«Сестринского дела и манипуляционной техники,

Скорой и неотложной медицинской помощи»

Протокол № ____ от ____________20 г.

Подготовка пациентов к лабораторным и инструментальным методам исследования

Тема: « Подготовка пациентов к лабораторным методам исследования»

Практическое занятие № 26

«Правила подготовки пациента сбор материала для лабораторных исследований».

Вопросы:

1. Характеристика основных лабораторных методов исследования мокроты.

2. Подготовка пациента, собор мокроты на общий анализ, направить материал в лабораторию.

3. Подготовка пациента, собор мокроту на бактериологическое исследование, направление материал в лабораторию.

4. Характеристика основных лабораторных методов исследования мочи.

5. Подготовка пациента и собор мочи на общий анализ.

6. Подготовка пациента и собор мочи для исследования по Зимницкому;

7. Подготовка пациента и собор мочи для исследования на сахар.

8. Подготовка пациента и собор мочи для исследования по Нечипоренко.

9. Характеристика основных лабораторных методов исследования кала.

10. Подготовка пациента для сбора кала на скрытую кровь, собор и направление материал на исследование;

11. Подготовка пациента, собор кала на яйца гельминтов и направление материал на исследование.

12. Правила взятия мазков из зева и носа и направление на исследование.

13. Правила оформления направления на исследование.

14. Вопросы и практические задания для самоконтроля

Характеристика лабораторных методов исследования мокроты

Мокрота – это патологический секрет дыхательных путей. В диагностике заболеваний дыхательной системы важное место занимает исследование мокроты, позволяющее судить о характере патологического процесса. При общеклиническом исследовании мокроты определяют ее физико-химическое свойства и клеточный состав. При бактериологическом исследовании мокроты выявляют возбудителя патологического процесса, а также производят подбор антибиотика, эффективного при данном возбудителе.

Мокро́та (лат. sputum) - отделяемый при отхаркивании патологический секрет трахеобронхиального дерева с примесью слюны и секрета слизистой оболочки полости носа и придаточных пазух носа. Мокрота является ценным диагностическим материалом. Исследование мокроты:

ü Макроскопическое – обращают внимание на: характер мокроты, количество, цвет, запах, консистенцию, слоистость, наличие различных включений

ü Микроскопическое – проводится в свежих неокрашенных и фиксированных окрашенных препаратах. Элементы мокроты, которые обнаруживаются в нативном препарате: клеточные элементы, волокнистые образования, кристаллические образования.

ü Бактериоскопическое – позволяет выделить возбудителя заболевания в чистом виде при посеве мокроты на питательные среды, определить вирулентность и лекарственную устойчивость (чувствительность) выделенного микроорганизма, что необходимо для рационального подбора антибактериальных средств.

ü Цитологическое – с учетом соотношения ее клеточных элементов имеет значение для оценки активности заболеваний бронхов и легких, помогает установить преимущественность инфекционного или аллергического воспаления.

Правила техники безопасности при работе с биоматериалом

В экскрементах, носоглоточных выделениях, мокроте, моче и рвотных массах концентрация ВИЧ очень низка или ВИЧ не обнаруживается.

Однако соблюдать меры предосторожности необходимо, т.к. это позволит предотвратить передачу от пациентов других инфекционных агентов.

Меры предосторожности :

1. Избегайте непосредственного контакта с биологическими жидкостями. Работайте только в перчатках. Не допускайте боя лабораторной посуды и травм осколками стекла.

2. Обеззараживайте выделения пациентов перед сливом в канализацию.

3. Тщательно дезинфицируйте лабораторную посуду, судна, мочеприемники, петли для забора кала и т.д.

4. В случае попадания биоматериала на кожу, одежду, слизистые, немедленно провести обработку, следуя рекомендациям из приказа №351.

При работе с патологическим материалом, содержащим микробы, и особенно при культивировании патогенных мик­робов во избежание заражения персонала лаборатории необхо­димо соблюдать правила техники биологической безопасности. В зависимости от степени патогенности и контагиозности воз­будителей принято выделять четыре уровня биологической опасности и соответствующих мероприятий, необходимых для предупреждения заражения в лаборатории.

Первый уровень (работа с непатогенными микроорганиз­мами). Необходимо соблюдение стандартных правил (см. тему 1.1).

Второй уровень (работа с низковирулентными микроорга­низмами). К числу дополнительных правил и мероприятий относятся использование лабораторной одежды и защитных перчаток; обязательное обеззараживание всех загрязненных от­ходов; ограничение доступа в лабораторию. Для предотвраще­ния попадания микробов в воздух рабочего помещения выпол­нение механических манипуляций, сопряженных с высокой вероятностью распыления микроорганизмов, необходимо осу­ществлять в специализированных закрытых легкодезинфици-руемых настольных боксах.

Третий уровень (работа с высоковирулентными микроорга­низмами). К числу дополнительных правил и мероприятий относятся использование специальной защитной лабораторной одежды; контроль доступа в лабораторию. Все манипуляции с патологическим материалом необходимо осуществлять в спе­циализированных боксах.

Четвертый уровень (работа с возбудителями ООИ). Работа с возбудителями особо опасных инфекций (ООИ) разрешена ис­ключительно в специализированных режимных лабораториях,

Имеющих оборудование, необходимое для эффективной защи­ты от патогенных микробов, их контроля и уничтожения. К числу дополнительных правил и мероприятий относятся наличие отдельных помещений для смены лабораторной одеж­ды и душевых, обязательное обеззараживание всех отходов лаборатории. Все манипуляции с патологическим материа­лом необходимо осуществлять в специализированных на­стольных боксах, снабженных системами стерилизации возду­ха (см. тему 7.1).

■ ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКИХ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Обнаружение патогенных микроорганизмов, являющихся возбудителями заболеваний (например, микобактерии туберку­леза, гонококки и др.), имеет решающее значение для поста­новки диагноза.

Выявление роли условно-патогенных микроорганизмов в этиологии и патогенезе заболеваний должно быть основано на строгой аргументации. Обязательным условием является кли­ническое, эпидемиологическое, микробиологическое и сероло­гическое исключение возбудителей инфекционных болезней (например, возбудителей кишечных инфекций, венерических болезней и др.). Для оценки роли условно-патогенных микро­организмов в патологии могут быть использованы следующие критерии.

1. Выделение микроорганизмов из крови, спинномозговой жидкости или других жидкостей организма, которые в норме у здоровых людей являются стерильными.

2. Обнаружение в исследуемом материале, особенно при дисбактериозах, условно-патогенных микроорганизмов в до­статочно больших количествах (например, 10 5 -10 7 микробных клеток в 1 мл). Для этого проводят количественное определе­ние микроорганизмов по числу КОЕ в 1 г или 1 мл испытуе­мого образца. Эти количественные показатели могут варьиро­вать в зависимости от вида микроорганизмов, типа исследуе­мого материала, характера и стадии заболевания.

3. Повторное, многократное (в течение суток или через сутки) выделение одного и того же микроорганизма из одного и того же материала от больного (например, из крови при сепсисе и т.д.).

4. Обнаружение идентичных условно-патогенных микроор­ганизмов в разных образцах материала (например, при пище­вых токсикоинфекциях - в промывных водах желудка, рвот­ных массах, испражнениях, пищевых продуктах).

5. Нарастание титра антител в 4 раза и более в парных сыворотках крови больного в отношении условно-патогенного микроорганизма, который предполагается как возбудитель дан-

ного патологического процесса. В ряде случаев рекомендуется использовать в качестве антигенов аутоштаммы микроорганиз­мов, выделенные от больных.

6. Положительные кожно-аллергические реакции у больных с аллергенами, приготовленными из условно-патогенных мик­роорганизмов.

7. В случае внутрибольничных (нозокомиальных) инфек­ций - выделение идентичных культур микроорганизмов от группы больных.

8. Совпадение данных лабораторного определения чувстви­тельности микроорганизмов к антибиотикам с эффективнос­тью антимикробной терапии в клинических условиях, под­тверждаемое улучшением состояния больного и уменьшением количества или элиминацией соответствующих микроорганиз­мов.

9. Условно-патогенные микроорганизмы (синоним: оппор­тунистические) представляют собой большую группу микроор­ганизмов, занимающих различное систематическое положение. Они встречаются среди аэробных и анаэробных бактерий, гри­бов, простейших. В клинической микробиологии наиболее час­то встречаются условно-патогенные микроорганизмы, относя­щиеся к родам Staphylococcus, Streptococcus, Escherichia, Klebsiel­la, Proteus, Entewbacter, Citrobacter, Serratia, Pseudomonas, Haemo­philus, Bacteroides, Veillonella, Vibrio, Peptococcus, Peptostreptococ-cus, Mycobacterium, Mycoplasma, Candida и др.

■ ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ЛАБОРАТОРНЫХ МИКРО­БИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Результаты лабораторных исследований оформляют на спе­циальных бланках, которые передают лечащему врачу.

1. В ответе прежде всего указывают наличие патогенных, а также условно-патогенных микроорганизмов, обнаруженных при микробиологическом исследовании. Сообщают также дан­ные лабораторного определения чувствительности микроорга­низмов к антибиотикам.

2. При обнаружении микробных ассоциаций перечисляют все микроорганизмы, указывают доминирующие виды и коли­чественные микробиологические показатели.

3. В соответствии с правилами международной номенкла­туры в ответах приводят видовые названия микроорганиз­мов, например: Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa и т.д.

4. С целью ускорения лабораторных исследований в ряде случаев при выделении условно-патогенных микроорганизмов вполне допустимо в ответе ограничиться указанием только родовой принадлежности обнаруженных микроорганизмов, на­пример Proteus sp., Candida sp. и т.д.

Аэробные бактерии Грамположительные бактерии

Chryseobacterium indologenes Chryseobacterium meningosepticum Enterococcus faecalis и другие виды Enterococcus Erysipelothrix rhusiopathiae Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Staphylococcus saprophiticus и другие виды Staphylococcus Streptococcus pyogenes Streptococcus agalactiae

Грамотрицательные бактерии

Burkholderia cepacia Citrobacter koseri Edwardsiella tarda Eikenella corrodens Enterobacter spp. Escherichia coli Haemophilus influenzae Klebsiella spp. Listeria monocytogenes Moraxella catarrhalis Proteus vulgaris Proteus mirabilis Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas putida Pseudomonas fluorescens Salmonella enterica

подвид enterica биовар typhimurium Serratia spp. Spirillum minus Streptobacillus moniliformis Vibrio vulnificus

Анаэробные бактерии

Неспорообразующие грамотрица­тельные анаэробы

Bacteroides fragilis

и другие виды рода Bacteroides

Prevotella melaninogenica

и другие виды рода Prevotella

Porphiromonas spp.

Fusobacterium spp.

Veilonella spp.

Неспорообразующие грамположи­тельные анаэробы

Peptostreptococcus spp. Propionibacterium acnes

Спорообразующие грамположи­тельные анаэробы

Clostridium perfringens Clostridium novyi Clostridium septicum Clostridium histolyticum Clostridium ramosum Clostridium sporogenes Clostridium tetani

Бактерии, перечисленные выше, вызывают гнойно-воспали­тельные процессы различной локализации, в том числе анги­ны, фурункулы, циститы и пиелиты, плевриты, перикардиты, сепсис и др. Многие из этих возбудителей встречаются в нор­мальной микрофлоре человека и проявляют свою патогенность только при нарушении нормальной экологии.

Стафилококки, стрептококки, протей, эшерихии и анаэроб­ные бактерии нередко вызывают смешанную инфекцию как в разнообразных сочетаниях между собой, так и с другими мик­роорганизмами - вирусами, грибами.

Тема 12.1. АЭРОБНЫЕ БАКТЕРИИ -ВОЗБУДИТЕЛИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И РАНЕВЫХ ИНФЕКЦИЙ

▲ Программа

1. Биологические свойства возбудителей гнойно-воспа­лительной и раневой инфекции, их патогенность, эко­логия, особенности инфекции и эпидемиология вы­зываемых заболеваний.

2. Микробиологическая диагностика.

3. Диагностические препараты, профилактические и ле­чебные препараты.

А Демонстрация

1. Рост а- и р-гемолитических стрептококков на кровя­ном агаре.

2. Рост и образование пигмента P.aeruginosa на агаре.

3. Диагностические и лечебно-профилактические пре­параты.

ЗАНЯТИЕ 1

▲ Задание студентам

1. Микроскопировать и зарисовать мазки из чистых куль­тур возбудителей гнойных инфекций: S.aureus, S.pyo­genes, P.aeruginosa, E.coli, P.vulgaris. Окраска по методу Грама.

2. Микроскопировать и зарисовать мазки из гноя, содер­жащие возбудителей: стафилококков, стрептококков. Окраска по методу Грама.

3. Ознакомиться с питательными средами, применяемы­ми при микробиологической диагностике гнойных и раневых инфекций. Указать назначение отдельных пи­тательных сред.

4. Микробиологическое исследование при раневых и гнойных инфекциях:

а) указать материал, подлежащий исследованию;

б) микроскопический метод: микроскопировать мазок
из гноя, окраска по методу Грама. Сделать вывод;

в) наметить план дальнейшего исследования.

ЗАНЯТИЕ 2

Задание студентам

1. Микробиологическое исследование гноя:

а) учесть результат посева гноя на кровяной агар в
чашке Петри, описать подозрительные колонии,
отметить наличие гемолиза, составить план даль­
нейшего исследования;

б) учесть результаты определения лецитиназы и плаз-
мокоагулазы у выделенной культуры стафилококка.
Сделать вывод;

в) учесть результаты определения чувствительности
культуры стафилококка к антибиотикам. Сделать
вывод.

2. Микробиологическое исследование мочи. Определить количество бактерий в 1 мл мочи по результатам ме­тода секторных посевов. Дать заключение.

3. Серодиагностика ревматизма. Ознакомиться с описа­нием стрептолизиновой реакции. Внести в протокол результаты определения анти-О-стрептолизина в сы­воротке крови больного. Сделать вывод.

4. Дать краткую характеристику демонстрируемым анти­микробным, диагностическим и лечебно-профилакти­ческим препаратам.

Методические указания

Материал для исследования: раневое отделяемое, гной, экс­судат, моча, мазки со слизистых оболочек (носоглотки, зева и др.), кровь при подозрении на сепсис.

Микробиологическая диагностика стафилококковых инфекций МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование (схема 12.1.1). Из иссле­дуемого материала (за исключением крови) готовят мазки для первичной бактериоскопии, окрашивают по методу Грама и микроскопируют. Наличие в препаратах грамположительных кокков, располагающихся в виде гроздевидных скоплений (рис. 12.1.1; на вклейке), позволяет поставить предварительный диагноз стафилококковой инфекции. Следует иметь в виду, что в патологическом материале стрептококки редко образуют ти­пичные скопления, чаще располагаются поодиночке или не­большими группами по 2-3 бактерии.

Бактериологическое исследование. Испытуемый материал засе­вают петлей на чашки с кровяным и желточно-солевым агаром

Рис. 1.4. Культура дрожжей Sac--charomyces cerevisiae при раз­ных методах микроскопии К с. 14. а - микроскопия мазка, окрашен­ного метиленовым синим; б - тем-нопольная микроскопия; в - фазо-во-контрастная микроскопия- г - люминесцентная микроскопия. Ок­раска корифосфином.

Рис.2.2.1. Смесь стафилококков и кишечных палочек. К с. 23. Окраска по методу Грама.

Рис.3.2.1. "Пестрый ряд". К с. 46.

а - ферментация углевода до кислоты и газа; б - отсутствие ферментации;

в - образование индола; г - образование сероводорода.

Рис.6.2. Постановка опыта специфической трансдукции (схема).Я" с. 26

пп™Ь Г i dga " ; б ~ реципиент E - coli 1ас "; в - Рост колоний реципиентного „» рп Т^- ВДо; г *" ^Раженная транслирующим фагом X dgal культура b.coli lac ; д - рост колоний трансдуктантов (красного цвета), несу­щих ген gal, на среде Эндо.

Рис.6.1. Постановка опыта трансформации. К с. 68. контает С пе?™г5 НК " в ™ еленно? из B.subtilis; б - реципиент B.subtilis; в -

селенной с^Л ЫХ ба,СГерИЙ С ДНК; Г ~ рост колоний Рекомбинантов на штамма н L?™ со й С1 Р ептоми «ином; д - отсутствие роста реципиентного 1мма на селективной среде со стрептомицином; е - рост колоний реципиент­ного штамма на среде без стрептомицина.

Рис.6.3. Постановка опыта по конъюгации. К с. 70. а - рост колоний бактерий донора на минимальной среде без стрептомицина; б - рост колоний рекомбинантов на селективной среде со стрептомицином без лейцина; в - рост колоний бактерий реципиентов на полной среде со стрептомицином и лейцином; г - отсутствие роста бактерий донора на среде со стрептомицином; д - донор-культура E.coli F , lei , su 5 ; е - контакт между бактериями донора и реципиента; ж - реципиент-культура E.coli F", lei", st/; з - отсутствие роста бактерий реципиента на селективной среде со стрептомицином без лейцина.

Рис. 12.1.1. Staphylococcus aureus и Streptococcus pyogenes в гное. Окраска по методу Грама. К с. 160.

Рис. 12.2.1. Clostridium perfringens в отечной жидкости. К с. 174.

Рис.19.1.1. Тельца Бабеша -Нег-ри в нейронах гиппокампа. Срез головного мозга человека. К с. 305. Окраска по методу Романовского - Гимзы.

(ЖСА) для получения изолированных колоний. Посевы инку­бируют при 37 °С в течение суток. На следующий день исследуют выросшие колонии на обеих средах. На кровяном агаре отмечают наличие или отсутствие гемолиза (рис. 12.1.2; на вклейке). На ЖСА S.aureus образует золотистые круглые выпуклые непрозрач­ные колонии. Вокруг колоний стафилококков, обладающих ле-цитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перла­мутровым оттенком. Для окончательного установления вида ста­филококка 2-3 колонии пересевают в пробирки со скошенным питательным агаром для получения чистых культур с последую­щим определением их дифференциальных признаков (табл. 12.1.1).

Таблица 12.1.1. Дифференциальные признаки стафилококков

S.epider-midis

Образование:

плазмокоагулазы + - -

лецитиназы + - -

альфа-токсина + - -

Ферментация:

глюкозы + + -

маннита в анаэробных условиях + - +

Чувствительность к новобиоцину S S R

Условные обозначения:(+) - наличие признака; (-) - отсутст­вие признака; S - чувствительный; R - резистентный.

Для постановки реакции на плазмокоагулазу плазму крови, разведенную в 2 раза, разливают по 0,4 мл в пробирки, вносят туда по одной петле каждой исследуемой культуры стафило­кокка и помещают в термостат при 37 °С. Через 2, 4 и 24 ч отмечают результаты опыта. При наличии плазмокоагулазы образуется сгусток. В некоторых случаях наряду с плазмокоагу-лазой и лецитиназой определяют фибринолизин, гиалуронидазу, ДНКазу.

Для установления источника внутрибольничной инфекции выделяют чистые культуры стафилококка от больных и бакте­рионосителей, после чего проводят их фаготипирование с по­мощью набора типовых бактериофагов. Фаги разводят до тит­ра, указанного на этикетке. Каждую из исследуемых культур засевают на питательный агар в чашку Петри газоном, высу­шивают, а затем петлей каплю соответствующего фага наносят на квадраты (по числу фагов, входящих в набор), предвари­тельно размеченные карандашом на дне чашки Петри. Посевы инкубируют при 37 "С. Результаты оценивают на следующий день по наличию лизиса культуры (см. рис. 5.3.2).

Определение чувствительности стафилококка к антибиоти­кам - см. тему 7.2.

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохими­ческие и молекулярно-биологические исследования.

Иммунохимические исследования. Основаны на об­наружении антигенов (токсинов и ферментов) возбудителя в материале от больного с помощью чувствительных серологи­ческих реакций.

Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих моле­кул можно поставить предварительный диагноз.

Микробиологическая диагностика стрептококковых инфек­ций (схема 12.1.2)

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Бактериоскопическое исследование. Мазки для первичной бактериоскопии готовят из патологического материала (за ис­ключением крови), окрашивают по методу Грама и микроско-пируют. При положительном результате обнаруживают цепоч­ки грамположительных кокков (см. рис. 12.1.1). Следует иметь в виду, что в патологическом материале стрептококки редко образуют типичные скопления, чаще располагаются поодиноч­ке или небольшими группами по 2-3 бактерии.

Бактериологическое исследование. Исследуемый материал за­севают на кровяной агар в чашку Петри. После инкубации при 37 "С в течение 24 ч отмечают характер колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. Из части материала, взятого из ко­лоний, готовят мазок, окрашивают по методу Грама и микро-скопируют. Для получения чистой культуры 1-3 подозритель­ные колонии пересевают в пробирки со скошенным кровяным агаром и сахарным бульоном. На кровяном агаре Streptococcus pyogenes образует мелкие, величиной с булавочную головку, мутноватые круглые колонии. В бульоне стрептококк в отличие от стафилококка дает придонно-пристеночный рост в виде хлопьев или зерен, оставляя среду прозрачной.

По характеру гемолиза на кровяном агаре стрептококки делятся на три группы: 1) негемолитические; 2) aj-гемолити­ческие, или зеленящие, образующие зеленоватую зону частич­ного гемолиза; 3) р-гемолитические, образующие вокруг коло­нии полностью прозрачную зону гемолиза.

Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по антигенным свойствам (табл. 12.1.2). Серогруппу стрептококков определяют в реакции преципитации с экстрактом из исследуемой культу­ры (полисахаридным преципитиногеном С) и группоспецифи-

ческими сыворотками (обычно 4 наиболее распространенные серогруппы - А, В, С и D). Развернутое серологическое иссле­дование и типирование стрептококков проводят главным об­разом для эпидемиологического обследования.

Таблица 12.1.2. Дифференциальные признаки стрептококков

Биологическую опасность, или риск для здоровья людей и окружающей среды,могут представлять инфицированныеорганизмы или биологический материал, содержащий микроорганизмы или токсины биологического происхождения.

Биологическая безопасность – порядок осуществления лабораторных исследований и специальное оснащение микробиологических лабораторий, которые защищают персонал лабораторий и окружающую среду при работе с потенциально инфекционными микроорганизмами.

Уровень биобезопасности – уровень мер предосторожности, необходимых при работе с потенциально опасными биологическими агентами. Различают 4 уровня биобезопасности (табл. 1). В зарубежных странах более высокий номер уровня биобезопасности означает возрастающий риск при выполнении лабораторных исследований.

Таблица 1

Характеристика уровней биобезопасности

В Республике Беларусь и России по степени опасности для человека и окружающей среды также выделено 4 группы возбудителей инфекционных заболевани, однако, наоборот, более низкий номер группы означает возрастающий риск при выполнении лабораторных исследований.

I группа – возбудители ООИ: чумы, натуральной оспы, геморрагических лихорадок (Ласса, Эбола и др.).

II группа – возбудители высококонтагиозных бактериальных, грибковых и вирусных инфекций: сибирской язвы, бруцеллеза, туляремии, холеры, сыпного тифа, бластомикоза, бешенства, СПИДа, гепатитов В и С и др., ботулотоксины и столбнячный токсин.

III группа – возбудители других инфекций: коклюша, столбняка, ботулизма, туберкулёза, трихомониаза, малярии, лейшманиоза, гриппа, полиомиелита, герпесвирусы и др.

IV группа – условно-патогенные (возбудители газовой гангрены, клебсиеллы, стафилококки, стрептококки, синегнойная палочка, некоторые кандиды и аспергиллы, амебиаза, аденовирусы, ротавирусы, энтеровирусы и др.) и непатогенные микроорганизмы.

Аттенуированные штаммы возбудителей I–II групп относятся к микроорганизмам III группы патогенности, а аттенуированные штаммы III–IV групп – к IV группе патогенности.

Работа с материалом, содержащим микроорганизмы I–II групп патогенности, требует соблюдения строгих мер безопасности для предупреждения случаев внутрилабораторного заражения, выноса инфекции за пределы лаборатории и предупреждения контаминации окружающей среды, поэтому исследования проводятся в специально оборудованных режимных микробиологических лабораториях специально обученным и вакцинированным персоналом (если существуют вакцины).

Работа с материалом, содержащим микроорганизмы III–IV групп патогенности, регламентируется Санитарными правилами «Безопасность работы с микроорганизмами III–IV групп патогенности и гельминтами», которые приняты к исполнению на территории РБ Постановлением Главного государственного санитарного врача № 40 от 27.07.2000 года. Исследования проводятся в бактериологических лабораториях при лечебно-профилактических учреждениях и при центрах гигиены и эпидемиологии.

В зависимости от выполняемых исследований, микробиологические лаборатории подразделяют на диагностические, производственные и научно-исследовательские. В соответствии с типами микроорганизмов, изучаемых в микробиологических лабораториях, выделяют бактериологические, вирусологические, микологические и протозоологические лаборатории.

В зависимости от уровня безопасности работы с микроорганизмами микробиологические лаборатории подразделяют на четыре группы риска.

I группа – лаборатории особого режима (максимально изолированные) с высоким индивидуальным и общественным риском.

II группа – режимные лаборатории (изолированные) с высоким индивидуальным и низким общественным риском.

III группа – базовые (основные) лаборатории с умеренным индивидуальным и ограниченным общественным риском.

IV группа – базовые (основные) лаборатории с низким индивидуальным и общественным риском.

На практических занятиях студенты работают с микроорганизмами IV группы патогенности. Учебный практикум кафедры микробиологии считается учебной микробиологической лабораторией, где необходимо соблюдать следующие правила:

1. В помещение бактериологической лаборатории нельзя входить без специальной одежды - медицинского халата и шапочки, запрещается приносить в практикум верхнюю одежду. Запрещается посещение студентов, работающих в лаборатории, посторонними лицами. Каждый студент должен работать на закреплённом за ним рабочем месте. Во время работы в лаборатории следует соблюдать тишину, порядок и чистоту.

2. В помещении бактериологической лаборатории категорически запрещается принимать пищу, курить, использовать косметические средства. Ежедневная тщательная уборка помещения производится влажным путём с применением дезинфицирующих жидкостей.

3. В каждой группе назначается постоянный дежурный студент, который осуществляет контроль за поддержанием чистоты и порядка студентами группы на рабочих местах.

4. Всё необходимое для работы на занятии (чашки, пробирки, пипетки, бактериальные петли) студенты берут на специальном столе, туда же ставится выполненная на занятии работа. Пробирки и чашки с инфицированным материалом обязательно подписывают (характер материала, название культуры, дата, № группы, ф. и. о. исследователя). После окончания работы рабочее место должно быть приведено в полный порядок.

5. Перед выполнением работ и после завершения необходимо вымыть руки с мылом. Весь материал, поступающий в лабораторию, должен рассматриваться как инфицированный.

Работа с биоматериалами проводится в резиновых перчатках. Запрещается прикасаться к биоматериалу и микробным культурам руками.

Если контакт с кровью или другими биологическими жидкостями произошел с нарушением целостности кожных покровов (укол, порез), пострадавший должен:

– снять перчатки рабочей поверхностью внутрь;

– выдавить кровь из раны;

– обработать повреждённое место (70% спиртом, или 5% йодом, или 3% раствором перекиси водорода, или другим разрешенным антисептиком);

– руки вымыть под проточной водой с мылом;

– на рану наложить пластырь;

– надеть напальчник;

– при необходимости продолжить работу, надев новые перчатки.

При отсасывании жидкого материала необходимо пользоваться резиновыми грушами, при этом пипетки должны быть закрыты ватными тампонами. Пипетирование ртом строго запрещено!

6. Посевы проводят у спиртовки, фламбируя при этом края пробирок, петли, шпатели!

Запрещается держать вблизи работающих спиртовок легковоспламеняющиеся материалы и вещества, оставлять без присмотра работающие спиртовки. Перед зажиганием спиртовки необходимо удостовериться, что её корпус исправен, фитиль выпущен на нужную высоту и распущен, а горловина и держатель фитиля сухие. Фитиль должен плотно входить в направляющую трубку держателя (иначе возможна вспышка паров внутри спиртовки и взрыв). Зажжённую спиртовку нельзя переносить с места на место, нельзя зажигать одну спиртовку от другой. Гасить спиртовку нужно, накрывая пламя фитиля колпачком, если это невозможно – залить водой. Задувать пламя запрещается.

7. При работе с биоматериалами необходимо пользоваться инструментами (петлями, шпателями, пинцетами, иглами). Инструменты, имевшие контакт с инфицированным материалом, фламбируются в пламени спиртовки, или полностью погружаются в емкости с дезраствором.

По окончании работы использованная стеклянная посуда и ватно-марлевые пробки сбрасывается в раздельные биксы. Ежедневно посуда, в которой содержался инфицированный материал, поступает в мойку после предварительной стерилизации автоклавированием.

8. Окрашивание препаратов проводится в специально отведённых местах. Отработанные предметные стёкла помещаются в эксикатор.

9. Микроскоп – точный оптический прибор, требующий строгого соблюдения правил работы с ним:

– поднимают конденсор до уровня предметного столика;

– открывают диафрагму;

– регулируют яркость встроенного осветителя или освещают поле зрения при помощи зеркала (при малой освещенность используют вогнутое зеркало, при достаточной – плоское);

– на предметное стекло с окрашенным препаратом наносят каплю иммерсионного масла, в которую под контролем глаза осторожно погружают объектив;

– поднимая тубус, смотрят в окуляр и вначале макро-, а потом микровинтом устанавливают чёткое изображение объекта;

– по окончании работы поднимают тубус, снимают препарат, марлевой салфеткой удаляют иммерсионное масло с фронтальной линзы объектива;

– микроскоп ставят в шкаф.

9. При аварии с посудой, содержащей инфицированный материал, или проливании жидкого инфицированного материала надо сообщить преподавателю. Немедленно проводится дезинфекция контаминированных поверхностей и предметов:

– осколки стекла помещают в бикс,

– на место аварии наносят дезраствор, время экспозиции 5–10 мин,

– затем дезраствор вытирают влагопоглощающей тканью.

Проводят антисептическую обработку контаминированных частей тела – мытьё с мылом.

10. При работе с электрооборудованием и электроприборами запрещается проверять наличие напряжения пальцами, переносить включённые приборы, находящиеся под напряжением, пользоваться неисправным элекрооборудованием и электропроводкой. При нарушении правил работы с электрооборудованием и электроприборами возможно поражение людей электрическим током и возникновение пожара.

11. В начале каждого семестра преподаватель проводит инструктаж по технике безопасности при работе с микробными культурами, биоматериалами, спиртовками и электроприборами. Инструктаж фиксируется в журнале личной подписью студента и заверяется подписью преподавателя.

ВНИМАНИЕ! С целью профилактики внутрибольничных инфекций запрещается посещение занятий на клинических базах в халате, в котором студент работал в микробиологической лаборатории!